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肝脏是人的中枢器官,在人体内的内外源有机物的转化和清除过程中起到关键作用。药物主要通过肝脏代谢,肝脏需要将药物中的有毒物质转化为对身体无毒或者毒性降低的物质才能发挥其治疗作用,所以肝脏最容易受到药物的损害。
药物性肝损伤(DILI)是指由多种药物及其相关代谢物诱发的肝损伤,主要包括天然药物、传统中药、生物制剂、处方药或非处方化学药、保健品、膳食补充剂等。起初可能表现为虚弱,但在严重的情况下,它可能导致肝纤维化、肝衰竭,甚至死亡。据统计,DILI的发病率约为0.014%-0.019%,而在中国,DILI的发病率估计为0.0238%。目前,DILI已被确认为是急性肝衰竭最常见的原因之一,并且发病率仍呈现逐年增加的趋势。而且DILI一旦发病,会在很短的时间内发展到比较严重的水平,患者在到达医院时就已经错过了最佳治疗时间。由于重度肝损伤的不可逆性,当今医疗技术只有排斥反应,所以还没有找到更好的治疗DILI的方式。只有肝脏移植这一种治疗方式可以救治肝损伤患者,但又因为人们的体质不同,肝移植后可能会出现排异反应。
佛手又称佛手柑、五指橘等,为芸香科柑橘属植物。果实呈手指状肉条形,果皮淡黄色且厚实,内皮柔软蓬松。果肉透明或淡乳黄色,口感爽脆,酸甜适中,带有独特香气。佛手是一种兼具药用和食用价值的中药,在中医药学领域得到了广泛的研究。其益处主要体现在对胰腺、肝和胃的保健功能上,因此常作为果品供人们鲜食。鉴于佛手具有调理肝脏、强化脾胃机能及缓解胃部不适等多种药理作用,近年来逐步被探索并应用于功能性食品的开发中。
佛手含有多种生物活性物质,包括挥发油、黄酮类物质、多糖、香豆素和氨基酸等营养成分。这些成分共同构成了佛手独特的营养价值和药用价值。多糖是佛手的主要功效成分之一,极具药用及保健的开发价值。目前,已有研究表明佛手多糖对酒精性干细胞损伤具有一定的保护作用,然而,佛手多糖改善肝损伤的效果受多种因素的控制。因此,探究生产工艺简单、成本低、天然来源的具备改善肝损伤的多糖产品及生产工艺,对于改善肝损伤的药物开发具有重要的应用价值。
来自中山大学药学院的蓝文健教授研究团队旨在克服现有药物性肝损伤治疗药物有限的不足,提供一种生产工艺简单、成本低的改善药物性肝损伤的广佛手多糖。
该研究首先探究了广佛手多糖的制备方法:①原料预处理:将100g广佛手药材粉碎,过60目分子筛,加入2L的95%乙醇,加热回流提取3次、过滤、45℃下干燥,得广佛手粉末;②热水浸提:向广佛手粉末中加水至料液比为70mL/g,温度95℃、提取时间2h,所得提取液浓缩至提取液体积的1/3,然后5000rpm/min离心20min,得浓缩液;③纯化:向浓缩液中加入AB-8大孔树脂(AB-8大孔树脂与浓缩液的体积比为1:10),室温摇床振荡处理2h,得AB-8处理液;再将脱蛋白溶液进行脱蛋白处理,具体是将AB-8处理液与Sevag试剂按体积比为4:1混合,在摇床上震荡30min,4000rpm/min,离心15min,取上清液,即得脱蛋白溶液,脱蛋白重复10次;再将脱蛋白溶液进行活性炭脱色处理,活性炭添加量为0.5%,温度30℃、脱色时间20min;然后15000rpm/min高速离心30min;离心所得上清液采用透析袋(Mw 3.5kDa)进行流水透析48h,透析液进行浓缩;随后向浓缩液中加入无水乙醇,至乙醇的终浓度为85%,于2℃下静置24h,离心,复溶,冷冻干燥即得到广佛手多糖。经测得广佛手多糖7.33g,硫酸-苯酚法测得总糖含量为87.83%,间羟基联苯法测得糖醛酸含量为74.11%。
随后,对制得的广佛手多糖的单糖组成、分子量等以及护肝活性进行测试。结果发现,该广佛手多糖是由岩藻糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成,其摩尔比为0.33:11.44:4.36:3.75:0.33:79.41:0.38。根据马克·霍温克方程计算,广佛手多糖的重均分子量为17.40kDa,数均分子量的值为10.99kDa,分散性系数PDI为1.58。在红外光谱结果中,在3428cm-1处,由O-H伸缩振动产生吸收峰,在2954cm-1处,在-CH2-上的C-H伸缩振动产生吸收峰,在1438cm-1处,由C-H变角振动引起吸收峰,这三处吸收峰被认为是多糖的特征吸收峰。在1743cm-1和1614cm-1处,由C=O伸缩振动和非对称振动引起的吸收峰,表明该糖为酸性多糖,在1021cm-1为吡喃糖的特征峰,且在921cm-1和762cm-1处为吡喃环的非对称和对称伸缩振动引起的特征吸收峰,且831cm-1和894cm-1处为多糖的α-和β-构型特征吸收峰,表明广佛手多糖为吡喃糖,且含有α-和β-构型的糖苷。
通过动物实验探究该广佛手多糖的体内护肝活性,研究选用30只雄性Balb/c小鼠,随机分为5组,每组6只:正常组、模型组、低剂量广佛手多。
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